
CTAB裂解液(RNase free))
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商品名称 | CTAB裂解液(RNase free)) |
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英文名称 | CTAB Solution(RNase free) |
品牌 | Coolaber |
货号 | ZT1008-1 |
储存条件 | RT |
CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
使用方法:
一、试剂准备
1、氯仿-异戊醇混合液(24:1)。96mL氯仿加4mL异戊醇混匀(自备或购买套装)。
2、65℃预热CTAB提取液。每15mL CTAB提取液加入 300uL的还原剂。
3、无水乙醇。
二、操作步骤(需要两天时间)
1、离心管中加入15mL预热的CTAB提取液(已加入300uL还原剂)。
2、液氮研磨2-3 g 植物组织,转移到CTAB提取液中,涡旋震荡1min 后置于65℃ 水浴中 5 min。
3、水浴完成后冷却2min,加入15 mL的氯仿-异戊醇混合液,剧烈震荡混匀。9,000 rmp离心15 min。
4、取上步离心管中上清液到新的离心管中,加入15 mL的氯仿-异戊醇混合液,剧烈震荡混匀。9,000 rmp离心15 min。
5、取上步离心管中上清液到新的离心管中,加入等体积的4M LiCl(终浓度2M),4℃沉淀过夜(12-16h)。
6、9,000 rmp,4℃离心60 min沉淀RNA,弃上清。
7、在沉淀中加入500 uL的70% 乙醇洗涤沉淀,9,000 rmp离心10 min,弃上清。
8、在沉淀中加入500uL的SSTE溶解沉淀,转移至1.5mL的离心管中,加入500uL的氯仿-异戊醇混合液,震荡混匀,12,000 rmp离心1min,将上清小心转移至新的离心管中。
9、在上清中加入1/10体积的3M 乙酸钠溶液,2倍体积的无水乙醇,置于-20℃沉淀2h或-80℃沉淀30min。
10、沉淀用400uL 的70%乙醇洗涤沉淀,12,000 rmp离心5min,小心吸弃上清,再加入400uL无水乙醇(无需吹打),12,000 rmp离心5min后,小心吸弃上清。
11、乙醇挥发,RNA干燥后加入50-100 uL DEPC水溶解RNA。电泳检测后置于-80℃保存。
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