pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒)
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| 产品名称 | pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒) |
|---|---|
| 品牌 | 碧云天Beyotime |
| 货号 | D3005-1μg |
pET-His-MCS-Avi是碧云天自行研发的用于在大肠杆菌(E.coli)中表达可被生物素标记的目的蛋白的原核表达质粒。该质粒在多克隆位点(Multiple cloning sites, MCS)位于His标签(His tag)和Avi标签(Avi tag)之间，目的蛋白表达后在ATP、生物素(Biotin)以及生物素连接酶(Biotin ligase) BirA存在的体外条件下，BirA催化生物素共价结合到目的蛋白N端的Avi标签上，从而对目的蛋白进行生物素标记。本质粒为氨苄青霉素(Ampicillin)抗性。
Avi标签是由15个氨基酸(GLNDIFEAQKIEWHE)组成的短肽标签，在ATP和生物素存在的条件下，BirA可以在Avi标签的赖氨酸残基上连接一个生物素，从而实现目的蛋白的生物素标记[1]。
生物素连接酶BirA特异性生物素标记Avi-tag有多方面的优点。Avi标签小且对融合蛋白的影响非常小，只针对Avi标签上的Lys残基进行特定位置的生物素标记，生物素标记效率高，可重复性好；体内或体外均可进行标记，标记后的蛋白与链霉亲和素(Streptavidin)的亲和力高，从而使Avi-tag技术可以应用于目的蛋白的固定吸附、纯化和检测等；相比于传统生物素化学标记的非特异性位点的标记，BirA催化的反应条件更温和，对被标记蛋白活力影响小，酶活效率高，标记特异性强[1]。
本质粒表达的目的蛋白可以采用如
BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐还原螯合型) (P2210
/P2218
/P2220)
、His标签蛋白纯化试剂盒(耐还原螯合型) (P2226)
以及BeyoGold™ His-tag Purification Resin (耐变性剂型) (P2233)
、His标签蛋白纯化试剂盒(耐变性剂型) (P2229S)
等进行纯化。pET-His-MCS-Avi质粒的主要信息如下：
| Feature Nucleotide | Position |
| Ampicillin | 209-1069 |
| ori | 1240-1828 |
| lacI | 3761-4843 |
| T7 promoter | 5230-5248 |
| His tag | 5323-5352 |
| Multiple Cloning Sites | 5378-5414 |
| Avi tag | 5428-5472 |
| T7 Terminator | 5540-5587 |
pET-His-MCS-Avi质粒(5799bp)的图谱如下：
pET-His-MCS-Avi表达基因的详细图谱见说明书：
pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒).pdf
。pET-His-MCS-Avi中没有的酶切位点包括：
| AanI | AarI | AatI | AbsI | AcvI | AdeI | AflII |
| AhlI | AjiI | AjuI | AleI | AloI | AscI | AsiSI |
| AspA2I | AsuII | AsuNHI | AvrII | AxyI | BaeI | BbrPI |
| BbvCI | BcuI | BfrI | BlnI | BmgBI | BmtI | BplI |
| Bpu14I | Bse21I | BseRI | BsiWI | Bsp119I | Bsp1407I | BspOI |
| BspTI | BspT104I | BsrGI | Bst98I | BstAFI | BstAUI | BstBI |
| BstSNI | Bsu36I | BtrI | Cfr9I | CpoI | CsiI | CspI |
| Csp45I | CspCI | DraIII | Ecl136II | Eco53kI | Eco72I | Eco81I |
| Eco105I | Eco147I | EcoICRI | EcoT22I | FalI | FseI | I-CeuI |
| I-PpoI | I-SceI | KflI | MabI | MauBI | MfeI | Mph1103I |
| MreI | MspCI | MssI | MunI | Nb.BbvCI | NheI | NsiI |
| NspV | Nt.BbvCI | OliI | PacI | PalAI | PasI | PceI |
| Pfl23II | PI-PspI | PI-SceI | PmaCI | PmeI | PmlI | PsiI |
| Psp124BI | PspCI | PspLI | PsrI | RgaI | RigI | RsrII |
| Rsr2I | SacI | SalI | SanDI | SbfI | SdaI | SexAI |
| SfaAI | SfiI | SfuI | SgfI | SgrDI | SgsI | SmaI |
| SmiI | SnaBI | SpeI | SrfI | Sse8387I | SseBI | SspBI |
| SstI | StuI | SwaI | TspMI | Vha464I | XmaI | XmaCI |
| XmaJI | Zsp2I |
pET-N-His-Avi中的单酶切位点包括：
| AatII | G,ACGT`C | 77 | KpnI | G,GTAC`C | 5398 |
| Acc65I | G`GTAC,C | 2116 | MluI | A`CGCG,T | 4488 |
| AccI | GT`MK,AC | 5394 | MscI | TGG|CCA | 2917 |
| AgeI | A`CCGG,T | 5409 | NcoI | C`CATG,G | 5315 |
| AhdI | GACNN,N`NNGTC | 996 | NdeI | CA`TA,TG | 5378 |
| AlwNI | CAG,NNN`CTG | 1475 | NotI | GC`GGCC,GC | 5401 |
| ApaI | G,GGCC`C | 4285 | NruI | TCG|CGA | 3389 |
| BclI | T`GATC,A | 4474 | PaeR7I | C`TCGA,G | 5383 |
| BfuAI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 3305 | PciI | A`CATG,T | 1884 |
| BglII | A`GATC,T | 5210 | PflFI | GACN`N,NGTC | 2142 |
| BlpI | GC`TNA,GC | 5529 | PshAI | GACNN|NNGTC | 3647 |
| Bpu10I | CC`TNA,GC | 2779 | PspOMI | G`GGCC,C | 4281 |
| BsaAI | YAC|GTR | 930 | PspXI | VC`TCGA,GB | 5383 |
| BsaI | GGTCTC 7/11 | 2136 | PstI | C,TGCA`G | 754 |
| BspMI | ACCTGCNNNN`NNNN, | 3305 | PvuI | CG,AT`CG | 627 |
| BspQI | GCTCTTCN`NNN, | 2001 | SacII | CC,GC`GG | 5401 |
| BssHII | G`CGCG,C | 4077 | SapI | GCTCTTCN`NNN, | 2001 |
| BstEII | G`GTNAC,C | 4306 | ScaI | AGT|ACT | 515 |
| BstZ17I | GTA|TAC | 2117 | SgrAI | CR`CCGG,YG | 5169 |
| ClaI | AT`CG,AT | 5773 | SphI | G,CATG`C | 5021 |
| EcoNI | CCTNN`N,NNAGG | 4956 | SspI | AAT|ATT | 191 |
| EcoRI | G`AATT,C | 5797 | Tth111I | GACN`N,NGTC | 2142 |
| FspAI | TGC|GCA | 2907 | XbaI | T`CTAG,A | 5276 |
| HindIII | A`AGCT,T | 5766 | XhoI | C`TCGA,G | 5383 |
| HpaI | GTT|AAC | 3986 | ZraI | GAC|GTC | 75 |
pET-His-MCS-Avi质粒中推荐使用的测序引物序列如下：T7-R (5230-5248): 5'-CCCTATAGTGAGTCGTATTA-3'
pET-His-MCS-Avi的全序列信息：
D3005 pET-His-MCS-Avi (Avi标签原核表达质粒)全序列.txt
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| D3005-1µg | pET-His-MCS-Avi | 1µg |
| D3005-100µg | pET-His-MCS-Avi | 100µg |
| — | 说明书 | 1份 |
-20℃保存。
注意事项：本质粒未经碧云天书面许可不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人所在实验室外的任何个人或单位。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
1.首次使用1µg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2.100µg包装的本产品质粒浓度为0.1µg/µl，共1ml。可以直接用于酶切或者转化。
3.本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转入表达菌株。
参考文献：
1.Millard G.Cull, Peter J.Schatz. Methods in Enzymology. 2000. Volume 326:430-440.
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