BeyoMag™磁珠法病毒RNA/DNA抽提试剂盒
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| 产品名称 | BeyoMag™磁珠法病毒RNA/DNA抽提试剂盒 |
|---|---|
| 品牌 | 碧云天Beyotime |
| 货号 | R0083L |
碧云天的BeyoMag™磁珠法病毒RNA/DNA抽提试剂盒(BeyoMag™ Viral RNA/DNA Isolation Kit with Magnetic Beads)，也称BeyoMag™磁珠法病毒核酸抽提试剂盒(BeyoMag™ Viral Nucleic Acid Isolation Kit with Magnetic Beads)，是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，从含病毒的血浆、血清、体液、拭子及细胞及其培养上清、组织等样品中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地抽提RNA/DNA的试剂盒。抽提获得的病毒RNA/DNA样品(可能同时含有样品中的其它RNA/DNA)，后续可以用于病毒感染检测、病毒滴度检测各种常规用途。
本试剂盒抽提得到的病毒RNA/DNA可用于qRT-PCR、反转录、RT-PCR、PCR、qPCR、Northern、Southern、点杂交(Dot blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA或DNA克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析(Microarray)、高通量测序(High throughput sequencing)等对RNA/DNA质量要求较高的情况。
本试剂盒抽提病毒RNA/DNA的基本流程如图1所示。样品在裂解液中迅速裂解，释放出总RNA/DNA，然后让RNA/DNA特异性地结合到磁珠上，再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将高纯度的RNA/DNA洗脱下来。
图1. BeyoMag™磁珠法病毒RNA/DNA抽提试剂盒(R0083)抽提流程示意图。
本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的磁珠进行病毒RNA/DNA分离纯化，能有效避免传统的Trizol法抽提时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂。
本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒采用磁珠纯化，无需繁琐的病毒RNA/DNA沉淀步骤，抽提操作过程仅15-20分钟。相比于传统的Trizol抽提法或DNA抽提方法，本试剂盒的操作流程显著简化，缩短了抽提时间， 降低了病毒RNA/DNA被降解的风险。和国外同类磁珠纯化产品相比，所需操作步骤和操作时间基本一致。
本试剂盒适用于含病毒的血浆、血清、体液、拭子及细胞及其培养上清、组织等样品中病毒RNA/DNA的抽提。对于样品中RNA/DNA含量较低的情况下，为提高病毒RNA/DNA的提取量，建议自备Carrier RNA。Carrier RNA一方面可以提高微量病毒RNA/DNA在纯化过程中与磁珠的结合效率和洗脱效率，另一方面可以降低被可能存在的痕量残留RNase降解的风险。Carrier RNA在病毒含量越低的情况下效果越为明显。Carrier RNA推荐选购碧云天的
R0036 Carrier RNA (病毒RNA等抽提用)
。本试剂盒小包装R0083S可用于10个样品的RNA抽提，中包装R0083M可用于50个样品的RNA抽提，大包装R0083L可用于200个样品的RNA抽提。
包装清单：| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0083S-1 | BeyoMag™磁珠 | 0.2ml |
| R0083S-2 | 裂解液 | 6ml |
| R0083S-3 | 结合液(首次使用前加3.5ml无水乙醇) | 2.5ml(+3.5ml) |
| R0083S-4 | 洗涤液I | 6.5ml |
| R0083S-5 | 洗涤液II (首次使用前加-9ml无水乙醇) | 3.6ml(+9ml) |
| R0083S-6 | 洗脱液 | 1ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0083M-1 | BeyoMag™磁珠 | 1ml |
| R0083M-2 | 裂解液 | 30ml |
| R0083M-3 | 结合液(首次使用前加17.5ml无水乙醇) | 12.5ml(+17.5ml) |
| R0083M-4 | 洗涤液I | 32ml |
| R0083M-5 | 洗涤液II (首次使用前加45ml无水乙醇) | 18ml(+45ml) |
| R0083M-6 | 洗脱液 | 5ml |
| — | 说明书 | 1份 |
| 产品编号 | 产品名称 | 包装 |
| R0083L-1 | BeyoMag™磁珠 | 4ml |
| R0083L-2 | 裂解液 | 120ml |
| R0083L-3 | 结合液(首次使用前加70ml无水乙醇) | 50ml(+70ml) |
| R0083L-4 | 洗涤液I | 125ml |
| R0083L-5 | 洗涤液II (首次使用前加90ml无水乙醇) | 36ml(+90ml),×2 |
| R0083L-6 | 洗脱液 | 20ml |
| — | 说明书 | 1份 |
室温保存，一年有效。其中BeyoMag™磁珠长期不使用时，可以4℃保存，4℃可以保存更长时间。
注意事项：首次使用前，结合液和洗涤液II按照说明书或瓶标上的指示加入相应量的无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
需自备磁分离装置，推荐使用碧云天的
1.5/2ml磁分离架(FMS004
/FMS008
/FMS012
/FMS016
/FMS024
)。如果样品中含有细胞或组织，不影响病毒RNA/DNA的抽提，但须注意抽提获得的病毒RNA/DNA中包含细胞或组织的RNA/DNA。
为提高病毒RNA/DNA的提取量，推荐使用碧云天的
Carrier RNA (病毒RNA等抽提用) (R0036)
或自备Carrier RNA。本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是DNase/RNase-free，操作时应小心，避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是DNase/RNase-free。如果可能有DNase/RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
对于操作环境中DNase/RNase的去除，推荐使用碧云天生产的
RNase and DNase Away (R0123)
以去除实验桌面上或其它接触面上的DNase/RNase。使用冻存的样品抽提RNA的效果通常比新鲜的样品差一些。因为在样品冻融过程中一些RNase会被释放出来并消化样品中的RNA，建议尽量避免冻融。对于病毒样品，推荐使用碧云天生产的
RNALater™病毒RNA稳定保存液(R0141)
进行保存以保证样品RNA的完整性。本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
结合液、洗涤液中首次使用前添加无水乙醇后，须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
1.样品的准备。
a.液体样品的准备。
含病毒的血浆、血清、无细胞体液、拭子、细胞培养上清等样品，按照常规方法取样。每100µl液体样品加入300µl裂解液。轻轻颠倒混匀3-5次。
选做：为提高病毒RNA/DNA的提取量，建议在不含或含很少细胞或者组织的样品中加入Carrier RNA。推荐使用碧云天的
Carrier RNA (病毒RNA等抽提用) (R0036)
，或使用下面方法提取：取任意新鲜的细胞或组织，用抽提试剂盒(推荐R0024
/R0026
/R0027 RNAeasy™动物RNA抽提试剂盒(离心柱式))
或Trizol (R0011
/R0016
)法提取RNA，作为Carrier RNA。每个病毒样品需要2-5µg Carrier RNA，直接添加至裂解液中即可。b.细胞样品的准备。
收集50-100万左右带有病毒的细胞。对于悬浮细胞，1000-2000×g离心1分钟后弃上清，加入300μl裂解液，轻轻吹打8-10次至固悬物溶解、溶液澄清；对于贴壁细胞，吸净培养液后加入300μl裂解液，轻轻吹打5-10次至固悬物溶解、溶液澄清，转移至一洁净离心管内。
c.组织样品的准备。
取15-20mg带有病毒的动物组织，置于液氮中研磨成粉末，立即加入600μl裂解液。也可将组织置于1.5ml离心管中，迅速加入600μl冰浴预冷的裂解液，用微型电动匀浆器匀浆，或者用普通玻璃匀浆器进行匀浆。研磨或匀浆后，轻轻吹打匀浆液8-10次，室温放置3-5分钟。然后约14,000×g离心2分钟，将上清液移至新的离心管中。对于比较容易裂解且匀浆很充分的组织(如肝组织、脑组织等)可以不用高速离心而直接进入步骤2。
注：细胞的数量一般不超过500万，不超过100万细胞宜使用300μl裂解液，多于100万细胞宜使用600μl裂解液。动物组织的用量一般不超过30mg，用量过多可能会因裂解不充分导致得率下降。组织样品在裂解和离心后，离心管下部可能会有一些胶状物质，宜作为上清转移至下一步操作。如果弃除胶状物，会导致得率下降约30-50%。后续加入结合液后胶状物会消失。离心是为了去除未匀浆充分的明显块状物。如果裂解后仍有粘稠物，需增加吹打次数至溶液完全澄清。对于富含RNase的样品，裂解液中宜添加DTT至终浓度为40mM或添加β-巯基乙醇至终浓度为1%。
2.加入等体积(指病毒样品和裂解液的总体积)结合液至裂解液中，轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生，属于正常现象。
3.加入20µl BeyoMag™磁珠(使用前务必混匀)，轻柔混匀后，室温放置3-5分钟。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除液体。
注：磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。
4.加入600µl洗涤液I，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净液体。
5.加入600µl洗涤液II，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，尽量吸净液体。
6.重复步骤5一次。
7.将离心管室温放置3-10分钟，或置于37℃鼓风烘箱5分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
8.加入50-100μl洗脱液，轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，室温孵育3-5分钟，其间甩动离心管1-2次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，后续可以置于-20℃保存。所得溶液即为纯化的RNA/DNA。
注：如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20µl，但洗脱下来的RNA/DNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37℃预热片刻对提高得率会有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原磁珠再洗脱一次，可提高得率约10-30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15-40%的RNA/DNA。
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| R0035L | RNAeasy™病毒RNA抽提试剂盒(离心柱式) | 200次 |
| R0036-200μg | Carrier RNA (病毒RNA等抽提用) | 200μg |
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| R0077S | BeyoMag™磁珠法动物RNA提取试剂盒 | 12次 |
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| R0083S | BeyoMag™磁珠法病毒RNA/DNA抽提试剂盒 | 12次 |
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| R0118-500ml | RNALater™动物组织RNA稳定保存液 | 500ml |
| R0123 | RNase and DNase Away | 250ml |
| R0141-100ml | RNALater™病毒RNA稳定保存液 | 100ml |
| R0141-500ml | RNALater™病毒RNA稳定保存液 | 500ml |
| R0143-100ml | 病毒样品常规保存液 | 100ml |
| R0143-500ml | 病毒样品常规保存液 | 500ml |
| R0145-100ml | BeyoDirect™ RNA病毒直接qRT-PCR保存液 | 100ml |
| R0145-500ml | BeyoDirect™ RNA病毒直接qRT-PCR保存液 | 500ml |
| ST532 | Proteinase K (20mg/ml) | 0.2ml |
| ST533 | Proteinase K (20mg/ml) | 1ml |
| ST535-100mg | Proteinase K | 100mg |
| ST535-500mg | Proteinase K | 500mg |
| ST535-2g | Proteinase K | 2g |
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