
Western及IP细胞裂解液, 无抑制剂
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产品名称 | Cell Total Protein Lysate for Western Blotting & Immunoprecipitation |
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品牌 | 阿拉丁 |
货号 | C301898 |
产品英文名称 | Cell Total Protein Lysate for Western Blotting & Immunoprecipitation |
规格或纯度 | 无抑制剂 |
应用 | 适用于一般生物学及医学研究 |
特点 | 使用方法: (一)贴壁培养细胞1.取本品置于室温溶解混匀,根据实验要求加入酶抑制剂。2.去除贴壁细胞的培养液,用 PBS、NS 或无血清培养液清洗1次,低速离心,弃上清,留取沉淀。3.按照 6 孔板每孔加入150~250μl 含有酶抑制剂的裂解液的比例,加入本品。移液器轻轻吹打,使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解,通常裂解液作用于细胞 1~3s 内,细胞就会被裂解。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200~250μl。4.10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。5.后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。(二)悬浮培养细胞1.取本品置室温溶解混匀后,加入酶抑制剂。2.低速离心悬浮细胞,弃上清,收集沉淀。3.用手指轻弹细胞,使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入150~250μl含有酶抑制剂的裂解液的比例,加入本品。通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200~250μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞,充分裂解后应没有明显的细、胞沉淀。4.10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。5进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。(三)组织样本1.取本品置于室温溶解混匀后,加入酶抑制剂。2.把组织剪切成细小的碎片,越小越好。3.取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30min 以上的组织,迅速用液氮研磨,研磨过程尽量控制在1~2min 之内,以减少蛋白的降解。4.按照每 20mg 组织加入 150~250μl 裂解液的比例,加入含有酶抑制剂的裂解液。冰上或4℃裂解 15~30min。5.步骤 3、4 亦可以采用如下过程:按照每 20mg 组织加入 150~250μl 裂解液的比例加入含有酶抑制剂的本品。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆,直至充分裂解,该过程尽量控制在 1~2min 之内,以减少蛋白的降解。6.10000~12000g,4℃离心 5~10min(如无低温离心机,室温下离心亦可),取上清。7.进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。注意事项 1.去除贴壁细胞的培养液后,如果血清中的蛋白没有干扰,可以不用清洗。2.如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。3.如果细胞量较多,必需分装成 50~100 万细胞/离心管,然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分 |
储存温度 | 2-8°C储存, |
运输条件 | 冰袋运输, |
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